样本(血浆或纯化载脂蛋白)可用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、等电聚焦或二维电泳处理。这些方法对于鉴定载脂蛋白的性质、纯度和稳定性等方面是非常适合的。在分析血浆或血浆成分时, 蛋白质在电泳后经过免疫印迹法转移到硝酸纤维素薄膜上, 然后通过免疫方法检测特异蛋白带。

      全血样本放入含EDTA的试管中, 使EDTA的最终浓度为1.0mg/dl。立即低速离心后留取血浆样本。然后加入1.0mM苯甲基氟磺酰(PMSF, Sigma), 0.4uM抑肽酶和0.1mM丁羟基甲苯(BHT, Sigma)分别作为蛋白酶抑制剂和抗氧化剂。此样本可在-20℃下保存数月。

      所用的试剂包括: 丙烯酰胺、双胺烯酰胺、过氧化铵和四甲基乙二胺(TEMED)均为超级纯试剂, 由Pharmacia-LKB公司提供; SDS(分析纯)由BDH化学药品公司提供; pH范围在4-6之间的两性电解质和Bind Silane由Pharmacia-LKB公司提供。三羟甲基氨基甲烷、硼酸、甘氨酸、甲醇、乙醇、乙醚、脱氧胆酸钠和分析纯的尿素由Merck公司提供; 0.45um的硝酸纤维素薄膜由Scheleicher和Schull公司提供; 三氯化金、4-氯-1-萘酚和β-巯基乙醇由Sigma公司提供; 牛血清白蛋白由Boehringer公司提供; 烷基硫酸钠由Koda公司提供; N-乙基吗啉、三硝基甲苯X-100和硫柳汞(乙汞硫代水杨酸钠)由Dako公司提供。抗兔IgG抗体由Bio Maker公司提供; 抗Apo E、Apo AIV和Apo (a)抗体则由实验室自制。

      一、 十二烷基磺酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)