样本制备: 将20ul样本(含10ug蛋白), 5ul 20%SDS, 0.5ul巯基乙醇和1ul 0.015%溴酚兰甘油混匀并煮沸1分钟。取20ul加入SDS凝胶中。

      SDS-凝胶制备和电泳参照Neville法(详见方案1)。凝胶由上部的滞留凝胶和下部的分离凝胶组成。使用Biometra电泳槽, 凝胶完全凝结前,用Bind Silane(15ml Bind Silane 溶于20ml乙醇和5ml 10%醋酸中)处理凝胶上部的玻璃板, 玻璃板下部不应残留Bind Silane。

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      方案1: 载脂蛋白的SDS-PAGE法测定

      试剂:

      (1). 下部分用的6.6%聚丙烯胺凝胶

      a. 先用水溶解20.68g 三羟甲基氨甲烷(Tris), 然后加入浓盐酸和水使其pH达9.18及总体积至100ml。

      b. 将10.0g丙烯酰胺和0.1g双丙烯酰胺溶于水, 配成25ml混合液。

      c. 将120ul四甲基乙二胺(TEMED)与20ml水混合。

      d. 将50mg过硫化胺溶于20ml水中。

      (2). 上部分用的3.6%的聚丙烯酰胺凝胶

      a. 先用水溶解2.62g Tris, 然后加入浓硫酸和水使其pH至6.14,总体积100ml。

      b. 将10g丙烯酰胺和1.35g双丙烯酰胺溶于水, 配成总体积25ml的混合液。

      步骤:

      (1). 将4.2ml Tris溶液, 4.2ml过硫化胺溶液及4.2ml TEMED溶液与1.4ml水混合。