(2). 将混合溶液注入两块处理过的玻璃板(9x9cm, 间有1mm的隔离条)之间, 使凝胶长达7cm。加入几滴水饱和的正丁烷使其表面平整。凝胶聚合后将正丁烷用水洗掉。

      (3). 将2.5ml Tris/H2SO4溶液、0.9ml丙烯酰胺溶液、6.5ml过硫化胺溶液及12.5ul TEMED溶液混合。

      (4). 将以上混合液加入下部分凝胶之上。

      (5). 插入样品梳, 让凝胶发生聚合反应。

      (6). 拔出梳子, 然后加样。

      (7). 下槽中缓冲液由Tris-HCl(pH9.5)组成: 将5.17g Tris溶于水, 加入2M盐酸使其pH调到9.5. 然后加水使总体积为1升。

      (8). 上槽中缓冲液由Tris-硼酸组成: 将2.47g硼酸; 4.92g Tris和1.0g SDS溶于水, 然后加固态Tris和水使其pH至8.64及总体为1升。

      (9). 先用10mA/板电泳, 使溴芬兰带聚集, 然后增加电流到20mA/板, 最高电压为200V, 电泳1-2小时。

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      6.6%SDS-PAGE法适用于高分子蛋白的分离, 并且是Apo (a)表型定型的第一步。在小分子(分子量<100kDa)的分离和定性时, 需要在10%聚丙烯酰胺凝胶中进行SDS凝胺电泳。要达到此项要求, 在制备下部聚丙烯酰胺凝胶时需要将丙烯酰胺溶液量由2.8ml改为4.2ml而不加水。

      二、 等电聚焦

      样本制备: 含蛋白50ug的样本在50ul Tris-HCl(pH8.2)中室温下孵育1小时, 其中含1%烷基硫酸盐, 2%Ampholine(两性电解质, pH4-6), 5ulβ-巯基乙醇和10ul 8%蔗糖, 然后直接加入电泳槽内。