一、Apo AI和Apo AII的分离

      人类血浆Apo AI、AII可从HDL中分离出来, 而HDL是通过制备性序贯离心法从正常人禁食血浆中获得。

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      方案 7: Apo AI和Apo II定量分离方法

      (1). 用固态KBr 将血浆密度调至1.063g/ml。用Beckman 50.2Ti转子在5℃下以50000r.p.m超速离心24小时。弃去VLDL和LDL成分。

      (2). 将下沉液(用管切法获得)密度调到1.21g/ml, 然后在同一转子内, 以50000r.p.m在5℃下离心48小时。

      (3). 此次离心的上清液中含有HDL, 然后将上清液用pH7.1的1mM EDTA进行透析处理。

      (4). 将透析过的HDL放入6M盐酸胍溶液中37℃孵育3 小时。

      (5). 再将其用1mM EDTA(pH7.4)透析处理一次, 同时将HDL液的密度调至1.21g/ml, 在5 ℃下以50000r.p.m离心24小时。

      (6). 浮于上层的溶液中含有Apo AII, 下层液中含有Apo AI。将两者用0.15MNaCl和1mM EDTA(pH7.4)透析处理, 并在-20℃下用乙醇/乙醚(3:1)混合液脱脂处理3 次。

      (7). 将去脂样本溶于30mM Tris-HCl(pH8.6)和6M尿素液中, 然后放入阴离子层析柱内, 用300ml线性梯度盐溶液以4ml/分流速进行洗脱以获得纯的Apo AI和Apo AII。