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(8). 将各种含纯载脂蛋白成份的分部收集起来, 用PBS进行透析处理, 最后在-20℃下保存(1mg/dl)。
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Apo AI和AII纯化的其他方法包括: 对超速离心制备的HDL进行羟基磷石层析分析。对全血浆进行亲合层析分析以及对去脂HDL成份进行层析聚集或反相层析分析。 以上方法有些很费时, 有些则不能获得满意的纯度, 因而多数人喜欢采用相对简单的离子交换层析分析。
二、Apo AIV的分离
人类Apo AIV是用甘油三酯-磷脂乳胶吸收法及脱脂脂质结合蛋白阴离子变换层析法从去脂蛋白血清中纯化而来的。
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方案8: Apo AIV定量分离方法
(1). 将500ml密度1.25g/ml的血清以50000r.p.m超速离心, 弃去上浮的脂蛋白, 即得到去脂蛋白的血清样本(LPDS)。
(2). 用0.15M NaCl、50mM K3PO4(pH7.4)及0.05%依地酸二钠对上层清液进行透析处理。
(3). 同时制备400ml脂肪乳剂: 将400ml脂肪乳剂用SW28转子(Beckman)在4℃以25000r.p.m离心35分钟后, 留取上浮脂质, 并用PBS使其恢复到原来体积(400ml)即可。
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