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C类载脂蛋白定量分离的另一种方法是用预备性大小分离层析分析脱脂后HDL的载脂蛋白。HDL是由经典的序贯超速离心进行预处理。并用乙醇/乙醚混合液脱脂。脱脂后HDL中的Apo混合物再用Varian Model5060层析分析仪和Micro Pak TSK3000 SW制备性高压液相层析分离。
五、Apo B100和B48的分离
由于这两种蛋白的分子量大, 且具有疏水性, 因此在不用去垢剂的情况下, 不可能在无脂状态下使他们纯化。下列方案是介绍相应脂蛋白类(分别为LDL和乳糜微粒)的提纯方法。
(一)、LDL的分离
LDL的提纯是通过多次密度超速离心完成的。然后, 用多种技术清除其伴有的血浆蛋白和脂蛋白其他成份[白蛋白、Apo A类、Apo C类、Apo E及Lp(a)]。既使将LDL再次离心, 也不能将Lp(a)与LDL分离。
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方案10: Apo B的分离方法
(1). 以低速离心分离出新鲜血浆, 然后加入硫酸庆大霉素(0.1mg/ml)、氯霉素(0.05mg/ml)和重氮化钠(0.2mg/ml)以防止Apo B被细菌降解。 加入EDTA(1mM)和PMSF(0.05mg/ml)以防止其被蛋白水解酶降解。所有缓冲液及密度液均需含有这些添加剂。
(2). 用50.2Ti Beckman转子以40000r.p.m速度在5℃下按血浆密度(d=1.006g/ml)离心18小时, 然后将VLDL及乳糜微粒从血浆中清除。最后用固体KBr调节下层液密度到1.063g/ml, 再将其用同一转子以50000r.p.m在5℃下离心24小时。 | 
