六、Lp(a)的分离

      选择血浆Lp(a)浓度大于50mg/dl的供血者提供分离Lp(a)用的全血浆。600ml上述血浆中加入下列抗蛋白水解酶及抗微生物试剂: 0.26ml PMSF (100mg/ml乙醇),120mg NaN3, 60mg邻巯基苯甲酸乙基汞化钠, 0.45ml抑肽酶(2mg/ml)及0.6ml 0.5M Na2EDTA。

      纯化方案由一个连续的超速离心过程组成。若需要Apo (a), 可将纯化的Lp(a)二硫化还原剂孵育, 使之离解为Apo B和含Apo (a)含两部分。然后进行再次超速离心使LDL成分上浮, 而Apo (a)沉于管底。

───────────────────────────

      方案11: Lp(a)的分离方法

      (1). 应用50.2Ti Beckman转子, 血浆用量480ml, 血浆密度用固体KBr调至1.063g/ml, 在20℃下以49000r.p.m超速离心48小时。

      (2). 从离心管中部抽吸回收含Lp(a)的脂蛋白成分。试管上部为漂浮的VLDL和LDL, 而底层为HDL和其他血浆蛋白成分。

      (3). 然后调节Lp(a)部分密度至1.10g/ml, 20℃下以49000r.p.m离心20小时。这样可使剩余的HDL杂物沉于管底, 而含Lp(a)的脂蛋白成份上浮。

      (4). 为提取Apo (a)蛋白, 将第二次超速离心提纯的Lp(a)与1mM二硫代1.2.3.4丁四醇(DTE)在室温下孵育1小时。孵育应在充满N2的封闭玻璃管内进行。