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(二)、分析的线性范围是有限的, 所测结果位于标准曲线之外的样本应用0.15M NaCl稀释并重新分析。这在高脂血症的血清样本尤其如此。在测总胆固醇时或测甘油三酯前, 这些样本分别常规进行1:3和1:4的稀释。
(三)、分离的脂蛋白所含胆固醇和甘油三酯浓度的测定与血清中的胆固醇和甘油三酯测定完全一样。将含脂蛋白成分的待测溶液用上述方法分析即可。但在测定分离的脂蛋白中胆固醇和甘油三酯时可能会遇到两个问题:
1. 在某些脂蛋白中(如VLDL)胆固醇和甘油三酯水平较低会导致测定不准确。为解决这个问题, 可加入TBHBA(2.4.5─3溴─3─羟基苯甲酸)以加强颜色反应。TBHBA加入胆固醇颜色反应剂中, 使其混合浓度为0.5%(W/V)而反应剂按正常量配制。在进行测定时也要绘出同含TBHBA样本的标准曲线。
2. 在测定由沉淀法制备的HDL样本中的胆固醇时, 沉淀法用的金属离子(特别是锰离子)干扰胆固醇的氧化反应, 可通过在胆固醇测定试剂中加入EDTA来解决这一问题。通常是在试剂即将使用前于48ml胆固醇试剂中加2ml EDTA(4.17gNa2EDTA 和 3.54g Na3EDTA溶于100ml蒸馏水中)。
(四)、为避免分析中的日常变化及保证结果的准确性和重复性, 在每组分析样本中应设置几个质控样本(每10-15个待测样本中设1个质控样本), 作为组内对照的已知胆固醇和甘油三酯浓度的质控血清有许多厂家提供。另外, 还有一系列外部质控方案。Wellcome Diagnostics公司制定的国际性方案; 在英国Birmingham公司的Wolfson实验室全部使用"国家外部质控评估方案"; 在美国此项工作由"疾病控制中心(Centers for Disease Control, CDC)"完成。他们通过提供已知胆固醇和甘油三酯浓度的样本来对各实验室所测结果的可靠性进行定期评估。 |