培养基中生长的细胞表达不同程度的LDL受体。所以有可能用于细胞表面LDL受体结合分析。培养的纤维母细胞, 平滑肌细胞, 中国仓鼠卵巢细胞和肝细胞系应用最广。在受体结合试验之前5-7天, 将细胞从培养瓶中转移到各独立孔中代传培养, 其目的在于在实验时获取近于汇合(confluence)的培养细胞。实验用的代传培养法详见方案1。

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    方案1: 代传培养细胞的方法

    (1). 从培养瓶中移取培养基, 每个T75瓶用约2ml的胰蛋白酶/EDTA洗涤单层细胞一次(0.05%胰蛋白酶, 0.53mM EDTA, 0.22um滤膜过滤, 分装, 4℃下保存一月或-20℃下保存至使用)。

    (2). 从瓶中吸出胰蛋白酶洗液, 另加入3-4ml胰蛋白酶, 将培养瓶放置水平位。

    (3). 当瓶中细胞开始集拢(但未分开)(1-3分钟),立即将胰蛋白酶抽出并用力敲击瓶壁将细胞移开; 若在胰蛋白酶抽出前细胞已开始分离, 敲击瓶壁将细胞移开, 加入含10%血清的培养基, 将所有培养基(包括细胞)移入一无菌离心管内, 1000rpm离心10分钟, 将细胞中的培养基吸出。

    (4). 细胞中加入10ml温热(37℃)的含血清培养基。可用Dulbecco’s的改良的Eagle’s培养基(DMEM), 它含10%牛血清(FBS), 它可作多数成纤维细胞和平滑肌细胞系的培养液。用吸管反复吸冲使细胞完全悬浮, 用Coulter计数器或血细胞计数仪计数一份细胞悬液的细胞数。