小鼠腹膜巨噬细胞可采用改良的Cohn和Beason方法获得,　多用雌性Swiss/Webster

小鼠。

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    方案2: 获取小鼠腹膜巨噬细胞方法                                              

    (1). 在一个密闭的广口瓶内用2-3ml Metofane(甲氧基氟烷,Pitman-Moore)一次麻醉四只小鼠。

    (2). 脱颈处死小鼠, 将它们背朝下放置, 用95%EtOH冲洗腹部, 用镊子将腹部皮肤提起使其与腹膜分开, 再剪开皮肤, 插入剪刀使切口扩大, 并展开皮肤。

    (3). 用带20-22号针头的12cc注射器将8-10ml灭菌磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)注入腹腔。轻摇小鼠振动腹膜, 将小鼠侧放用无菌注射器和针头抽取腹腔液体(含有腹膜上的巨噬细胞), 将几只小鼠的腹膜液汇集到放置于冰上的50ml灭菌试管中。弃去带血或变色的液体。(变色液体表明有可能有肠漏)。

    (4). 在4℃下200g离心15分钟, 使细胞完全悬浮于5-10ml DMEM中, 在Conlter计数器上计数细胞, 并使用Channelyzer(Conlter Electronics)使细胞群可见。腹膜渗出液中会含有血小板、红血球、大的淋巴细胞及占多数的巨噬细胞群。按细胞数及样本中巨噬细胞所占的实际比率进行最后稀释。通常每只小鼠可获1-3×106个巨噬细胞。