从血中分离的人类单核细胞培养7天可分化成巨噬细胞 。

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    方案3: 获取人类单核-巨噬细胞方法

    (1). 将血液收集到柠檬酸右旋糖(ACD)中; 每50ml血加9ml ACD。

    (2). 转入无菌的50ml锥形管, 在4℃下500g离心35分钟。

    (3). 吸出血浆, 收集位于血浆与红细胞之间的淡黄色白细胞层。

    (4). 每50ml管中加20ml细胞悬液, 加15ml PBS,再用长的腰穿针按Boyum介绍的方法在管底层加15ml Ficoll-Hypaque(Falcon Labware)分离培养基(d=1.077-1.080g/ml)。

以400g在室温下离心45分钟(不用制动闸)。

    (5). 也可将全血用PBS 1:1稀释, 将它直接覆于Ficoll-Hypaque上(或将Ficoll-Hypaque注于其下)。这一作法往往可使血细胞回收增加, 但它也引起较高比例的红细胞和血小板混杂。

    (6). 吸出大部分上层PBS。收集Ficoll-Hypaque和PBS界面的白细胞层。用5倍体积的PBS稀释白细胞, 再低速离心沉淀细胞(300g, 4℃, 35分钟)。

    (7). 尽可能移出全部上层清液, 用40ml PBS中再悬浮细胞。在4℃下200g离心10分钟沉淀细胞。再重复一次。

    (8). 反复吸冲使细胞悬浮于10ml DMEM中, 取出一份在Conlter计数器上进行细胞计数, 用Channelyzer计算单核细胞百分比。