一、制备性超速离心法

      将高密度脂蛋白(HDL)分离为各亚类前, 通常必须先从血浆中分离出总HDL。常采用的方法是浮选制备性超速离心法。应特别强调的是, 要使用新鲜未冰冻的血浆样本, 以防HDL亚类的组成和性质发生变化。但在某些情况下(如只需用梯度凝胶电泳做进一步分析时), 使用在-20℃贮存已2月的血浆样本仍可获得满意的结果。由于溶液中盐浓度和方法固有的高引力可使某些载脂蛋白(Apo AIV、E和C)从HDL颗粒中大量游离出来, 所以必须严格控制标准条件, 特别是离心次数, 以保证在不同的制备中得到相同的结果。应用该方法作定量分析时其回收率大约为92-96%。

      (一)、试剂

      按表3-39-1中所列数值制备一系列不同密度的溴化钠(NaBr)溶液。用蒸馏水溶解NaBr, 总体积为1升。用密度计测定这些溶液的密度, 加固态NaBr或蒸馏水将密度调至要求值。制定所需密度溶液的最简便方法是: 先配好比要求密度大得多的溶液, 再按下列公式计算, 将高密度溶液稀释至所需密度的溶液。

      X=(d2-d1) /(d1-1)

    其中X=配制所需密度时加入1ml NaBr溶液所需的蒸馏水体积(ml); d1=所需的密度, d2=测定的密度。

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