| (8). 用细玻璃棒搅拌每管内的剩留物(下层液), 使通常存在于管底的含HDL的胶状"板块"(pellet)再悬浮。
(9). 收集下层液, 加入等体积溶液(密度1.357g/ml)至最终密度为1.21g/ml.用密度计测量以确保其终密度为1.21g/ml。若密度不足, 可采用加入固体NaBr的方法, 以免体积明显增大。
(10). 将调好的溶液加入离心管(同上第4步骤), 用溶液(d)将各离心管平衡。
(11). 以40000rpm在16℃下离心40hr。
(12). 取出体积约2ml的全部上层液。如需要定量回收, 可在距顶端2ml处用管切法收集上层约1.5ml的液体, 再在量杯中用溶液(d)将体积加至2ml。通常要保证整个HDL层都被收集到, 避免任何细小、稠密及粘滞的HDL颗粒损失。为达到此目的,必要时可增加HDL的收集体积。
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二、沉淀法
用沉淀法分离血浆中HDL成份, 尽管该方法在临床研究中有一定的价值, 但此方法在HDL亚类分析上的应用却有限。因为通过该方法获得的终产物虽不含其他类脂蛋白, 但仍为HDL与血浆蛋白的混合物, 因此不适合HDL亚类的进一步分离。此外, 沉淀法分离脂蛋白时对其颗粒的破坏性并不比超速离心法小。 |
