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      方案3: 沉淀法分离HDL2和HDL3

      试剂:

      (a). 肝素: 将490mg肝素钠盐(Sigma)溶于2ml蒸水。

      (b). 1.06 M MnCl2: 209.8g MnCl2.4H2O溶于蒸馏水, 加水至终体积1升。

      (c). 肝素/MnCl2溶液: 将1.5ml溶液(a)加入25ml溶液(b)中, 其最终分析范围内浓度为肝素1.26mg/ml, MnCl2 0.091M。

      (d). 硫酸右旋糖酐溶液: 将1.43g硫酸右旋糖酐(分子量15000, Sochibo)溶于0.15M NaCl中, 并用0.15M NaCl加至100ml。必须使用指定的硫酸右旋糖酐, 使其分离结果具有可重复性。

      步骤:

      (1). 3ml血浆中加入0.3ml肝素/MnCl2, 彻底混匀,  室温下放置10-20分钟。

      (2). 以1500g在4℃下离心1hr。立即取出部分透明上清液进行下一步操作, 并同时进行总HDL测定。

      (3). 在2ml上层清液中加入0.2ml硫酸右旋糖酐溶液, 彻底混匀, 室温下放置20分钟。

      (4). 以1500g在4℃下离心30分钟, 立即取出部分透明上层清液作HDL3-胆固醇(C)测定。

      (5). 总HDL-C和HDL3-C浓度测定后, HDL2则等于总HDL-C减去HDL3-C。应注应该注意的是该方法并未能使HDL2或HDL3从血浆蛋白中游离出来。