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(7). 如需要进一步分离IDL, 在下层液中加入足量的高密度液使其密度达到1.019g/ml。高密度液的需要量可按下列公式计算:
D-D1
V2 = V1 x ───
D2-D
V1=溶液的初始体积; V2=需要加入的高密度液的体积; D=要求达到的密度;D1=初始密度; D2=高密度液的密度。(0.15M生理盐水和血浆的密度大约为1.006g/ml)。
(8). 混匀后将上述1.019g/ml密度的溶液置入离心管内。此时需要用密度1.019g/ml的贮存液将其平衡。一系列不同密度的贮存液(如1.019, 1.063, 1.125, 1.21g/ml)可用不同量的高密度液加入0.15M生理盐水制备。
(9). 在10-15℃下以30000r.r.m速度离心24小时, 将含IDL的少量上层液吸出, 用适量高密度液与剩余的下层液混合; 使其密度达到1.063g/ml。
(10). 将上述液体加入离心管, 并用密度1.063g/ml的贮存液平衡, 在10-15℃下以30000r.p.m速度离心28小时。 |