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(11). 上层少量LDL液吸出后, 将收集的下层液的密度调至1.21g/ml, 然后在10-25℃下以30000r.p.m速度离心48小时使HDL上浮。再将小量HDL液吸出。该方法亦可用于分离单种脂蛋白成份。以下两过程可同时进行以节省时间。例如, 可通过使血浆密度升至1.21g/ml后离心48小时即可把全部血浆脂蛋白成份分开。
(12). 如分离出的脂蛋白样本要用凝胶电泳技术进一步分析研究, 可先用低盐缓冲液(如pH8.0, 0.4%EDTA, 0.05%偶氮化钠, 10mM盐酸-三羟基甲基氨基甲烷液)在4℃下透析12小时, 将其中高浓度盐清除。有时HDL也应在贮存前进行透析处理。但应注意到这种方法制备的脂蛋白样本含有少量的白蛋白, 如有必要, 可用原始样本制备的条件将分离出的脂蛋白再行超速离心, 以清除其中的白蛋白。
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(二)、用固定角头进行脂蛋白的定量分析
前面描述的方法适用于分离大量实验所用或供分析用的脂蛋白样本, 但其回收率很低, 当临床上需要测定脂蛋白的浓度时, 可采用另一种回收率较高、所用的样本量较少的方法。可选用50.3Ti Beckman转头, 并用配备18x6.5ml一次性使用的同质异晶聚合物管。 |