|
(2). 将超速离心管转动使其中溶液混合, 然后再加入1ml密度为1.063g/ml的溶液。
(3). 用数滴密度为1.063g/ml的溶液进行平衡处理, 然后在20℃下以40000r.p.m速度离心48小时。
(4). 用吸管移液法(管切法更好)将上层清液(为VLDL、IDL、LDL)移出, 然后将下层液置入5 ml容积的量瓶中, 加0.15M缓冲生理盐水至5ml。由此测出的HDL-C浓度很精确且适用于大多数情况。HDL可用1.21g/ml密度漂浮超速离心分离, 但此法需进一步校准体积和超速离心。并在相当程度上降低了回收率和结果的准确性。
─────────────────────────────
定量分析VLDL-C和HDL-C时, 常用双管法, 这能克服序贯漂浮法的复杂性和不准确性。其中一支试管为密度<1.006g/ml的样本。在禁食状态下主要是分离出VLDL。另一支试管则为分离HDL用的样本。这能分离出含HDL的下层液和含VLDL和LDL的上层清液。此管上层清液还要进行胆固醇测定。根据已知血清总胆固醇量, 按差值和回至收率(常>96%)可推算出LDL-C量。
此方法有时会很复杂, 例如当测定HDL3-C时, 需要用第三支试管以1.125g/ml的密度超速离心, 要达到此目的, 应将2ml血浆加入到一支6.5ml容积的试管中, 然后经计算加入一定量的"重液"(常为3ml)使其密度为1.125g/ml, 混合后再加1ml密度1.125g/ml的溶液, 并用几滴相同溶液平衡。 在以40000r.p.m速度离心48小时后, HDL3位于下层液中。密度较低的脂蛋白上浮于透明的上层清液中。 |