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脂蛋白分离和定量测定
来源:血脂网 编辑:FC   发布时间:2008-3-27 14:51:53

二、电泳法

    (一)、纸上和琼脂凝胶电泳

    在早期对高脂蛋白血症进行分类时, 多采用血浆纸上电泳及后来发展的琼脂凝胶电泳, 这两种方法都只是半定量测定法。他们可将血浆脂蛋白分离为α(HDL)、β(LDL)和前β(VLDL)脂蛋白带, 乳糜微粒则滞留在原位。在分析某些异常的高脂蛋白血症时这两种方法仍有价值。如在分析III型高脂蛋白血症时, 有人仍主张用这些方法作为筛选方法。但此种宽的β带也常见于IIb或V型高脂蛋白血症, 因此在考虑为III型高脂蛋白血症时, 最好测定Apo E表型或基因型, 或采用超速离心法进一步分析。

    (二)、聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳(PAGE)

    1. 一般注意事项

    梯度凝胶电泳根据脂蛋白颗粒大小将其分离, 脂蛋白通过浓度呈梯度增高的聚丙烯酰胺在电埸中移动, 随着聚丙烯酰胺浓度的增加, 基质中孔径逐渐变小, 这就使原已按其颗粒大小分开的带电荷的脂蛋白发生不同程度的移动滞缓。当达到其分离极限时, 颗粒的移动最终停止。PAGE已广泛用于不同种类的载脂蛋白分离和载脂蛋白的多态性分析。

    2. 方法学的注意事项

    a. 凝胶  聚丙烯酰胺梯度范围取决于分离的脂蛋白颗粒类型。一般而言, 4-30%的梯度凝胶能有效地分离HDL, 而2-16%的梯度凝胶能分离LDL, IDL和VLDL。应注意VLDL的穿透性是有限的, 一般只有小于40nm直径的脂蛋白颗粒才能通过。梯度凝胶可从很多公司定购(如Flowgen, Bio-Rad公司)。

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