b. 样本准备 梯度凝胶电泳可直接分析血浆样本或超速离心分离出的脂蛋白样本。但因其分离有赖于分子的大小, 在准备样本时必须采取一些措施以保证颗粒的完整性。其中包括在血浆中加入一些试剂以防止: (1)氧化修饰(加入终末浓度为0.4%的EDTA, 并在氮气中贮存); (2)脂蛋白变性(加10mM 5.5-二巯基2-硝基苯并酸,以抑制卵磷脂胆固醇酰基转移酶的活性); (3)蛋白酶降解(加入0.015%苯甲基氟磺酰, PMSF); (4)细菌性破坏(加入0.05%偶氮化钠)。同时要避免长时间贮存。梯度凝胶电泳所用血样本不宜冰冻。在电泳前, 超速离心分离出的脂蛋白样本中的高浓度盐类应进行透析处理使之降低。

    c. 电泳  将凝胶加入垂直式制胶夹板, 在10℃电泳缓冲液中(90mM缓血酸胺基质, 80mM硼酸, 3mM EDTA, pH8.3)以125V电压将凝胶预处理20分钟。用含4%庶糖和0.05%溴酚兰溶液稀释标本(4:1体积比), 将相当于10-15ug蛋白的脂蛋白样品溶液加入凝胶器中, 电泳时在凝胶中依次通入15V电压25分钟, 70V电压20分钟和125V电压24 小时, 总共相当3000V.小时电流。

    d. 染色  所用染料类型依测定样本而定,蛋白质染色适应于已分离的脂蛋白样本, 但当血浆样本电泳时, 大量的血浆蛋白掩盖脂蛋白区带, 此时必须使用脂质染色。