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g. 测定的其他方法: 通过Western印迹法,可使脂蛋白电泳转移到硝酸纤维素薄膜上(详见后述)。一般说来, 脂蛋白的转移不如蛋白质容易, 但在印迹缓冲液中加入去垢剂可增加转移, 因其促进载脂蛋白从脂蛋白中释放出来。然后, 用特异抗体识别转移到硝酸纤维素薄膜上相应的载脂蛋白, 而脂蛋白的位置可由其特异的载脂蛋白成分来鉴别。
(三)、等电聚焦(Isoelectric focusing, IEF)
等电聚焦的方法可将脂蛋白按其等电点不同而分开。聚丙烯酰胺或琼脂凝胶都可采用。目前脂蛋白的等电聚焦还没有用于临床, 但这种方法在分离载脂蛋白和测定其多态性方面很有价值。最有临床意义的是鉴别Apo E的异构体(Apo E2、E3和E4)这可对Apo E进行表型分类, 它有助于诊断III型高脂蛋白血症。同时也可以检出Apo CII, 这对研究重症高甘油三酯血症有较大的帮助。
三、制备性超速离心法
脂蛋白的水合密度较其他血浆蛋白低, 可通过漂浮超速离心将其从血浆中分离出来。这种方法可用于制备大量有待进一步分析的脂蛋白样本或少量临床研究的样本, 加入NaCl和/或KBr后, 血浆密度增加, 在超速离心过程中各类脂蛋白因其密度不同而上浮速率各异。每类脂蛋白可通过依次增加血浆密度而分离。超速离心一般需较长时间, 有证据显示在超速离心时各类脂蛋白之间出现脂质与载脂蛋白相互交换, 此乃本项技术的主要缺点。但目前脂蛋白分类的标准是按其水合密度而定, 因此超速离心仍然是多数研究所采用的方法。用于脂蛋白分析的三种常见的超速离心法是: 分析性超速离心、区带超速离心和制备性超速离心(采用固角转子或甩平头转子)。 |