一、梯度凝胶电泳

      (一)、原理

    梯度凝胶电泳的一般原理在前面已作介绍。尽管该项技术可将大多数蛋白混合物分离成清晰的非连续性带, 但因HDL的高度不均一性, 而常产生宽而重叠的带。但是该方法所获结果重复性好, 所以是一种定量测定HDL亚类的可靠方法。

      (二)、聚丙烯酰胺梯度凝胶

      通常分离HDL类所用的凝胶为4-30%线性梯度的丙酰胺凝胶,  但是当LDL或其他脂蛋白存在时, 则凹面胶更有用。市售的预制胶(如Flowgen, 以前大部分采用Pharmacia凝胶, 但此类产品最近已停产)尽管昂贵但却很方便。但有报道说它们不适合用于将被测物转移到硝酸纤维素薄膜上进行免疫学的蛋白分析研究, 因为其转移效率极低。为达此目的, 研究者应自制梯度胶。但是, 实验室制的凝胶缺少预制胶的精确性及可重复性, 因而可能不适合定量研究。尽管实验室自制的凝胶梯度设备可产生满意的结果, 但制梯度胶的最好方法是采用凝胶制备盒(Pharmacia/LKB; Bio Rad)。

      (三)、 电泳

      1. 试剂

      (a). 0.09 M Tris/0.08 M 硼酸/3 mM EDTA, pH 8.35 (贮存缓冲液): 将1.090g Tris、4.95g H3BO3和1.12g Na2EDTA 溶于蒸馏水, 调节pH至8.35, 加水至1升。

      (b). 5-磺基水扬酸(10%): 50g 5-磺基水扬酸溶于蒸馏水, 体积加至500ml。