|
I部分和II部分的各分部中A280值相加, 即可得出血中不含和富含Apo E的HDL 浓度, 这是用一个转换系数(0.41mg HDL-蛋白/一单位A280)计算出来的。该方法重复性好, 两年间对同一受试者进行5次富含Apo E的HDL浓度测定, 其变异系数为9.5%。
三、免疫亲合层析
(一)、原理
免疫亲合层析为HDL亚群的分离提供了一个相当有力的工具, 因为它是少数几种不用高浓度盐酸进行超速离心的方法之一。经此处理后, 一些载脂蛋白会从自然状态HDL颗粒中明显分离出来, 血浆与固定的单一特异抗体混合, 洗涤除去非结合的及非特异结合的蛋白和脂蛋白后, 用适当的溶剂将含特异载脂蛋白抗原的脂蛋白类混合物分离出来。这种方法用于分离含有Apo AI和Apo AII的HDL颗粒与仅含Apo AI而不含Apo AII颗粒的分离。这一技术可获得有关含特异载脂蛋白的HDL亚类的物理特征及代谢作用方面的有用信息。这一方法的几种形式已被成功地采用, 其中包括下面将要介绍的含Apo AI及Apo AII的HDL分离操作。必须强调的是, 由于不同抗体的亲合性及其他特征不同, 因而结合与洗脱的条件应随制备抗体的变化而变化。
(二)、 一般方法
1. 试剂
(a). 0.2M磷酸钠/0.5M NaCl(pH6.8)
i). 31.2g NaH2PO4·2H2O溶于蒸馏水, 加水至1升。 |
