(5). 用(b)缓冲液将非连结蛋白从柱上洗出。

      (6). 用(c)液洗出非特异结合蛋白。

      (7). 最后用(d)液(立即在其中加入固体Tris以缓冲溶液)或(e)液洗脱含Apo AI或含Apo AII的脂蛋白颗粒。两种洗脱液的HDL回收都很高。据报道, 用乙酸洗脱时, 卵磷脂:胆固醇酰基转移酶的回收更高, 但胆固醇酯转移活性只有用硫氰根作去吸附剂才能检出。

      (8). 将洗出样本浓缩到适当体积备用。

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      (三)、含Apo AI及Apo AII脂蛋白分离

      新鲜血浆与抗Apo AII免疫吸附剂在4℃孵育1小时, 装入一小硼硅酸盐柱, 最后依次从柱上冼出非结合蛋白, 非特异结合蛋白及含Apo AII的脂蛋白, 方法详见上文。

      (四)、含Apo AI不含Apo AII脂蛋白分离

      将上述获得的非结合血浆蛋白与抗Apo AI免疫吸附剂4℃孵育1 小时。按上法依次洗出非结合蛋白、非特异结合蛋白及含Apo AI而不含Apo AII的脂蛋白。

      四、分离HDL亚类的其他方法

      凝胶滤过层析可用来分离出足量的HDL亚类, 以供其成份测定。此方法的分辨力不足以将HDL亚类分离成不连续带, 因而HDL被洗成单一的宽带。但是, 洗脱液 中基本上含 HDL2b、HDL2a、HDL3a及HDL3b亚类, 这可用梯度胶电泳来鉴定。