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(6). 在20V电压下电泳20分钟, 然后70V电泳30分钟, 最后以120V电泳24小时。
(7). 关电源, 从电泳槽中取出凝胶夹层, 分开玻璃板, 并立即将凝胶置于(b)液中固定1小时。然后用Coomassie蓝即(c)溶液染色1.5小时, 再用甲醇:乙酸:水(5:7.5:87.5, V/V/V)混合物脱色数天。此间轻轻水平摇动并经常换洗涤液。凝胶存于9%的乙酸中, 这样染色带在室温下至少在3个月内可保持稳定。
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(四)、密度测定法
肉眼观察分离HDL亚类的照相记录在大多数情况下已经足够, 但有时条带复杂而重叠, 在要求精确结果时必须对条带区域进行扫描测定。许多仪器均符合此要求(Bio Rad 620 显像密度测定仪, Pharmacia/LKB扫描XL激光密度测定仪, BeckmanAppraise, Joyce Loebl色谱扫描仪)
梯度凝胶电泳将人类HDL分为五个亚类, 它们的RF范围见表6-5所示。其中两个亚类(HDL2a和HDL2b)与另三个亚类(HDL3a、HDL3b、HDL3c)分别与超速离心分离的HDL2与HDL3相应。这种方法所获得的HDL亚类平均颗粒直径与电镜及分析性超速离心测定的结果相符。此方法提供了划分HDL亚类的一套实用而系统的基础。因此, 表3-39-2所示RF范围内的亚类分布, 应通过测定此范围内吸收峰值面积来确定。在此表中RF值为特定HDL亚类峰与标准品BSA峰迁移距离的比值。 |
