| (二)、肝素─葡聚糖凝胶的制备
偶联的肝素─葡聚糖凝胶市埸有售, 也可按操作说明(Pharmacia/LKB)用活化的Sepharose在实验室配制, 有些学者发现此类产品的结果并不十分满意, 且重复性差。在实验室全部配制肝素和葡聚糖凝胶, 尽管很费力, 但其产品具有很高的结合力, 并可获得重复性好的定量结果。
1. 试剂
(a). 2M Na2CO3: 21.2g Na2CO3溶于蒸馏水中, 体积为100ml。
(b). 溴化氰/乙腈: 10g CNBr(新鲜的)溶于5.0ml乙腈中, 用前配制, 于冰中放置。
(c). 0.2M NaHCO3(pH9.5): 25.2g NaHCO3溶于蒸馏水中, 用NaOH将pH调至9.5, 加水至3升。
(d). 0.1M NaCO3(pH9.5): 1.5升(c)溶液中加入1.5升蒸馏水。
(e). 肝素/NaHCO3: 0.5g肝素(钠盐)溶于(c)溶液100ml中。肝素的分子量和组成因来源不同而变化。来自猪小肠粘液的肝素(钠盐)(Sigma)在上述方法中使用可使结果准确可靠。
(f). 0.1M醋酸钠酸缓冲液(pH4.0): 16.40g醋酸钠溶于蒸馏水、用乙酸将pH调至4.0, 加蒸馏水至体积2升。
(g). 2.0M 尿素: 240g尿素溶于蒸馏水, 总体积为2升。
(h). 2M NaCl: 116.9g NaCl溶于蒸馏水, 使总体积为2升。
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