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      (三)、层析

      1. 试剂

      (a). 5mM Tris-HCl/0.05M NaCl(pH7.4): 1.83g Tris和8.76g NaCl溶于蒸馏水, 用盐酸将pH调至7.4, 加水至3 升。

      (b). 5mM Tris-HCl/0.05M NaCl/0.025M MnCl2(pH7.4): 0.61g Tris和2.92gNaCl 溶于蒸馏水, 用HCl将pH调至7.4, 加水至1升, 再加入4.95g MnCl2(用前加入, 因长时间放置后MnCl2会沉淀)。

      (c). 5 mM Tris-HCl/0.1M NaCl (pH7.4): 0.61g Tris和5.84g NaCl溶于蒸馏水, 用HCl调pH至7.4, 加水至1升。

      (d). 5mM Tris-HCl/0.6M NaCl(pH7.4): 0.61g Tris和35.1g NaCl溶于蒸馏水, 用HCl调pH至7.4, 加水至1升。

      2. 样本制备

      (a). HDL样本(1.063-1.210g/ml密度范围内经超速离心制备)用50倍体积的(a)溶液透析, 4℃下搅拌至少18小时, 并换缓冲液数次。

      (b). 加适量(a)缓冲液, 将浓度调至HDL蛋白量为4-8mg/ml。

      (c). 上柱前在HDL溶液中加入固体MnCl2, 使Mn攩++攪终浓度为25mM(如每ml加5.0mg MnCl2)。

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      方案6: 肝素-葡聚糖凝胶亲合层析分离富含Apo E和少含Apo E的HDL