(1). 搅拌肝素-葡聚糖凝胶浆状物, 静置数分钟后弃去上层清液以清除微细颗粒, 加入等量(a)溶液, 再搅拌以去除气体。

      (2). 浆状物装柱(12cm x 1.0cm内径), 最好用可调节容量的接头, 以去除柱顶的死腔。

      (3). 在4℃下完成余下的操作程序, 让(a)缓冲液以12-15ml/hr的流速过柱至少18小时, 以确保其达到平衡。

      (4). 上样前即刻让20-30ml(b)液过柱。

      (5). 将1.5ml HDL溶液(其中已加入MnCl2)上柱, 用2-3ml(b)溶液将HDL洗入柱内并放置过夜, 使其充分结合。

      (6). 层析柱和记录仪与分部收集器相连, 用(b)缓冲液洗脱非结合蛋白(I部分)直到280nm 处的吸收值回到基线(约20ml), 收集4ml洗出物。

      (7). 用(c)缓冲液代替冼脱液─(b)溶液, 用此缓冲液继续洗脱直到结合的HDL(II部分)完全从柱上洗出。

      (8). 最后用(d)缓冲液洗脱, 收集第III部分。

      (9). 用至少30ml缓冲液过柱使其平衡, 为下一次层析分离作准备。

      (10). 若需要定量的结果, 可用紫外分光光度计在280nm处测定各部分的吸收值。

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      典型的洗脱结果是: I部分(非结合HDL)以含无Apo E的HDL亚类为主, 大多属于HDL3亚类, 但也含有某些HDL2成份。II部分(结合的HDL)内为富含Apo E的HDL亚类, 这些主要由大颗粒HDL组成, 它们属于HDL2亚类。III部分含少量LDL和Lp(a)。含I部分和II部分的各分部冼脱成份可以收集并浓缩, 用于进一步的分析或代谢研究。搅拌池(Amicon, Sartorius)或诸如Centriprep及Centrisart I(Amicon, Sartotius)的离心浓缩管非常适合此目的。