上述用于HDL 亚类成份划分方法的有效性需通过测定分离亚类的颗粒大小及成份来判断。当分离的目的在于研究亚类的代谢作用或检查疾病状态以及由于生理性、饮食、药物治疗等其他因素引起的亚类浓度变化时, 详细了解这些参数特别是载脂蛋白的组成对了解其有关作用机制至关重要。
一、完整的HDL颗粒分析
(一)、梯度凝胶电泳
在详细分析亚类组成之前, 本方法对于初步估计HDL分离的程度是一相对简单而快速的手段, 因为颗粒在胶内迁移距离与颗粒大小有关。但是, 并不能认为位于同一RF区域的亚类就完全相同, 这是由于他们可能代表具有颗粒大小相同而组成不同的亚类。这种情况下RF差别非常小, 所以应在同一胶板上细心地比较各亚类。否则应在每一块胶板上设立一个参考标准, 这样可以消除可能由胶板之间变异而引起的误差。使用敏感的密度仪也很重要, 因为肉眼观察不能发现RF的细微差别。
(二)、电子显微镜
电镜为了解阴性染色的HDL及其亚类的大小分布和形态学提供了有价值的手段。实质上是将超速离心制备的HDL或用上述方法分离的HDL亚群用适当缓冲液透析, 在1%磷钨酸钠中调整浓度到100-250ug蛋白/ml, 然后将小滴加到Formavar-碳涂层的栅格内, 放大40000-60000倍观察。此方法需要昂贵的设备和非常精确的技术。
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