| (11)按上节中梯度胶的方法染色凝胶。
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(四)、电泳结果的评估
SDS凝胶中的载脂蛋白带通过将它们的分子量与标准蛋白相比较来鉴别。每种标记蛋白分子量的对数与其RF值(蛋白迁移距离除以示踪染料迁移距离)绘图。从曲线上即可读出载脂蛋白的值。8M尿素电泳分离出的带可通过标准的分离图形或与纯化载脂蛋白RF值相比较来识别。用此方法识别HDL亚类的小分子量载脂蛋白的成分很不容易, 主要是由于一些成分彼此非常接近。所以其结果要通过免疫方法(见下)或通过测定切割凝胶块中洗脱的载脂蛋白的部分氨基酸序列与已发表的序列资料相比较来确定。
肉眼观察电泳凝胶的染色可获得关于载脂蛋白组成与分布的有用资料。扫描测定峰面积可得到半定量数据。但必须强调, 每种载脂蛋白都有其独特的吸收特征, 所以测定的峰面积比值并不代表各种载脂蛋白成份的实际浓度分布。有可能的话,应制定每种载脂蛋白校准曲线。
三、免疫学方法测定载脂蛋白
在定量测定HDL及其亚类的载脂蛋白过程中, 与电泳有关的很多问题都可通过使用特殊的免疫分析法来解决。此方法可用于完整的HDL颗粒测定, 因此它可避免因脱脂引起的和染色中固有的技术性和理论性难题。这类方法包括ELISA(酶联免疫吸附测定), 免疫浓度测定, 盘状免疫扩散及放射免疫测定。 |