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在此再次强调, 载脂蛋白测定结果在方法之间有相当大的变化, 所以没有任何一种方法(不论是免疫测定还是电泳分析)能够提供绝对的载脂蛋白组成。丙烯酰胺凝胶上的载脂蛋白带被转移到合适的膜上后, 特异免疫反应是识别它们的理想方法。
四、类脂分析和颗粒成份分析
如要测定经上述方法分离出来的HDL亚类成份, 将相应部分用0.9%NaCL透析,并从每一种亚类收集液中取出数份供作以下测定。
(一)、总胆固醇和游离胆固醇
这些成份的浓度测定最方便的方法是使用市售药盒(Boehringer, Merck)作酶学测定, 需按厂家说明操作。胆固醇酯通过总胆固醇与游离胆固醇之差来计算。本方法的原理及操作注意事项已在第一节讨论。
(二)、甘油三脂
甘油三脂测定的酶学测定盒可从上述厂家购得。
(三)、磷脂
有多种化学及酶学方法可用于脂蛋白磷脂含量的测定。多数这类方法的基本原理是以高氯酸和过氧化氢将磷脂氧化成磷酸盐,然后在硝酸参与下形成磷酸盐与钼酸盐(和钒酸盐)的混合物, 最后比色测定混合物中的磷酸盐。另一种方法与磷脂分解及胆碱释放有关。胆碱被氧化成甜菜碱(三甲胺内脂)并产生过氧化氢,后者与苯醌色素原的产物偶合。Biehringer公司生产上述两种方法的试剂盒。 |