| 除了提供有关颗粒直径大小的重要资料外, 电镜还对检出非典型、非球形的HDL相当有价值。这些HDL包括肝脏灌洗液中的园盘状新生HDL及淋巴水肿液中较低密度的HDL(呈方形)。必须特别注意人为因素造成的改变: 包括蛋白聚积团块形成, 同时注意他们容易在操作过程中丢失成份。电镜测得的HDL亚群直径可用来证实梯度胶电泳和分析性超离心所测结果的可靠性。 (三)、分析性超速离心
本方法也需要昂贵的设备和操作经验, 它可提供HDL颗粒大小方面的有用资料, 并成为电镜及梯度胶电泳的有用辅助手般。HDL亚群用密度1.20g/ml的NaBr/NaCl溶液在26℃下透析处理。此密度下的校正漂浮率(F1.20)是根据超速离心过程中间断Schlieren峰的位置计算出来的。Donner实验室的研究显示分析性超速离心得出的三种HDL成份的颗粒直径与梯度胶电泳分离出的HDL2b、HDL2a及HDL3相近。超速离心和梯度胶电泳结果的一致性表现在: 分析性超速离心与梯度胶标准化扫描面积测出的大宗人群HDL亚类血浆浓度有高度相关性。
二、电泳测定载脂蛋白成份
(一)、脱脂
HDL及其亚类的载脂蛋白成份可在含解离剂(如SDS、尿素)的适当缓冲液中直接电泳测得。由于脂质部分的干扰, 电泳出的载脂蛋带常不能被清楚分开从而很难获得可靠的定量结果。因此电泳分离前对脂蛋白标本进行脱脂处理非常必要。在众多报道的脱脂方法中, 有两种方法已被普遍接受, 并在很多实验室被广泛用于常规分析。在这些步骤中, 因溶于有机溶剂而引起的小分子量载脂蛋白(Apo C)丢失可降至最低程度。 |
