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      方案8: 用乙醇─乙醚沉淀法使HDL脱脂

      试剂

      0.15M-NaCl/1mM EDTA: 17.5g NaCl和0.74g Na2 EDTA溶于蒸馏水加至2升。

      操作

      (1). HDL或其亚类的样本(含约5mg蛋白/ml), 用上述溶液透析过夜, 数次更换缓冲液。

      (2). 迅速将已透析的溶液注入含50倍体积-20℃预冷过的乙醇:二乙醚(3:2v/v)混合物的玻璃封闭烧瓶中。用注射器或自动加样器使注入溶液分散成小滴状,以便使其与有机相接触的表面积增大。

      (3). 混合物在无火花的-20℃冰箱中放置90分钟, 并不时摇动。

      (4). 将上清液移入预冷过的离心管中, 以700g离心10 分钟。离心机必须无火花, 且冷却到-20℃以下。必须采取严格的预防措施防止燃点低于-20℃的乙醚爆炸, 温度决不可超过-20℃。还要检查轴承不能发热, 离心管用大小合适的盖子封闭, 应用带螺旋盖的离心管以防止乙醚蒸气的扩散, 离心管必须防溶, 能承受乙醚/乙醇混合物存在时-20℃离心的影响. 使用Teflon FEP管(Nalge Co)较安全可靠。

      (5). 小心倒出上层清液, 留载脂蛋白小团块及少许溶剂于管底。