(7). -20℃下以700g离心10分钟。

      (8). 倒出上层清液。

      (9). 收集前两次的上层清液(如第(5)及第(8)步)。再次离心使载脂蛋白进一步沉淀, 将此沉淀与第一次的沉淀(第(5)步)混合。

      (10). 用原体积一半的二乙醚将沉淀混合物再洗涤离心5次。

      (11). 最后一次洗涤后, 倒出上清液, 再用液氮流除去管底的乙醚。载脂蛋白于-20℃下贮存。

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      方案9: 乙醇─二乙醚使溶解状态的HDL脱脂

      试剂

      20mM Tris-HCl/0.1M NaCl (pH8.5): 2.4g Tris 溶于蒸馏水, 用NaOH调pH至8.5。再溶入5.8g NaCl, 蒸馏水加至体积为1升。

      步骤:

      (1). HDL样本(含4mg蛋白/ml)用上述缓冲液4℃下透析过夜。换液数次并不断搅拌。

      (2). 室温下在加塞玻璃试管中加入等体积的二乙醚/乙醇(3:2 v/v), 充分振摇, 然后放置, 直到两相分开(约20分钟)。

      (3). 用移液管移出上层液。

      (4). 加入同样体积的二乙醚/乙醇(3:1 v/v), 振摇后放置, 移出上层清液。