(5). 重复这一提取过程5次。

      (6). 吹走底层的乙醚, 得到载脂蛋白的水溶液。此溶液在4℃下可保存2天, -20℃下保存一月。

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      (二)、SDS凝胶电泳

      在本方法中, 蛋白质与SDS在巯基乙醇存在下加热变性, 使二硫键解离。变性的多肽以固定的比重同SDS结合, 形成SDS-多肽复合物。它们具有相同的电荷密度, 因而在聚丙烯凝胶中迁移速度仅与分子大小有关。

      试剂

      (a). 0.25M Tris-甘氨酸(pH8.3)(凝胶缓冲液): 60.6g Tris和288g甘氨酸溶于蒸馏水, 必要时调pH至8.3, 用蒸馏水加至终体积2升。

      (b). 25mM Tris-甘氨酸/1mM EDTA/1%SDS/5%巯基乙醇(pH8.3) (样本缓冲液): 37.2mg Na2 EDTA、1g SDS、4.5ml巯基乙醇溶于已用水稀释10倍的(a)缓冲液中, 并用此稀释缓冲液(a)加至终体积100ml。

      (c). 25mM Tris-甘氨酸/0.05%溴酚兰/1%蔗糖(pH8.3) (示踪染料): 3.03gTris, 14.4g甘氨酸, 50mg溴酚兰, 1g蔗糖于蒸馏水, 加水至100ml。

      (d). 双-丙烯酰胺(30:0.8 wt/wt): 30g 丙烯酰胺和0.8g N,N'-甲叉丙烯酰胺溶于(a)缓冲液, 并以(a)液加至100ml。

      (e). 10%SDS(贮存液): 10g SDS溶于100ml凝胶缓冲液中。