(1). 将一份载脂蛋白溶于含SDS和巯基乙醇的(b)缓冲液中, 配成浓度为100ul缓冲液含20-60ug蛋白的溶液。这一过程应在有盖的微量离心管内进行。试管的大小应由现有样本管决定, 但50ul容积的试管也可使用。其中关键的一点是SDS与蛋白的重量比为3:1。若载脂蛋白是由溶解状态脱脂制备的, 它必须用(b)缓冲液透析。

      (2). 将样本管在100℃下水浴2分钟。

      (3). 让样本管在室温下冷却。

      (4). 每100ul载脂蛋白溶液加15ul巯基乙醇和10ul(c)液(示踪染料)。

      (5). 在丙烯酰胺平板上的每个加样孔中加入20ul样本。

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     为保证蛋白质完全变性及小分子多肽不与蛋白溶解产物混同, 此方法需作一些改进。电泳最好用市售平板式电泳系统(Pharmacia/LKB,Biorad,Gibco)。因为操作程序随不同厂家生产的不同系统而变化, 所以只能作大概的说明, 详细操作应按厂家指导进行。载脂蛋白也可通过试管凝胶电泳分离,但它如果不能形成二维分离的第一维, 一般就不主张用此方法, 因为随后会出现样品比较及凝胶扫描等方面的问题。

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     方案11: SDS电泳的操作