应用密度梯度超速离心技术可将LDL分离成几个亚类, 已有多种方法报道, 这些方法在梯度组成和得到的LDL亚类外观上有相当大的差别。但没有任何一种方法被认为是通用的。现将几种分离效果较满意的方法作一简介。具体采用的方法应由超速离心的范围及研究者备有的水平转子类型来决定。为了获得可靠的且重复性好的结果, 需要有高质量的密度构建仪和梯度成份收集方法。
用梯度凝胶电泳法可对LDL分离亚类进行特征鉴定。但该方法本身没有定量测定LDL亚类浓度的分辨力。因而将两种方法联用对全面估计可靠的LDL亚类分布是可取的。
一、密度梯度超速离心
(一)、Krauss和Burke的方法
这是用于LDL亚类分离最早介绍的密度梯度法, 并在诸多方面形成后来方法的基础。此分离技术可得到四种密度亚类, 分别称为LDL1, LDL2, LDL3, LDL4, 详见方案13。
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方案13: 用Krauss和Burker法进行LDL亚类的密度梯度超速离心分离。
(1). 方案1的改良法, 通过密度1.019-1.063g/ml的超速离心将LDL从血浆中分离出来。
(2). 用密度1.0400g/ml的NaBr溶液透析过夜, 换液2次。
(3). 在一9/16"×3"的Beckman polyallomer(同质异晶聚合物)管(超净离心管)内小心将2ml已透析过的LDL覆于2.5ml密度为1.0540g/ml的NaBr溶液之上, 再将2.5ml密度为1.0275g/ml的NaBr溶液覆于LDL液之上。