(4). 22-24℃, Beckman SW41转子, 40000rpm离心40小时。

    (5). 回收管内容物, 首先是顶层的0.5ml, 然后分6次, 每次收集1ml成份, 最后收集管底的0.5ml。

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     (二)、Chapman等人的方法

    本方法采用更为完备和更广的密度梯度范围, 它将LDL分离成八个或更多的部分, 各部分电泳迁移率、分析性超速离心的漂浮率、颗粒大小、类脂及载脂蛋白组成等均不相等。

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    方案14: Chapman法密度梯度分离LDL亚类

    (1). 用密度1.019—1.063g/ml范围的超速离心将LDL从血浆中分离出来,然后用密度1.040g/ml的NaBr溶液透析。

    (2). 用带蠕动泵的自动密度流仪II(Auto—DensiflowII)(Buchler仪器公司)或相当的密度梯度构建仪将4.5ml密度1.054g/ml的NaCl—KBr溶液泵入一9/16"×3"的Beckman超净离心管管底(管容积为13.2ml)。然后将下列各溶液依次覆于其上。

    * 3.5ml含15mg蛋白的透析过的LDL溶液

    * 2.0ml密度1.024g/ml的NaCl-NaBr溶液

    * 2.0ml密度1.019g/ml的NaCl溶液

    (3). 15℃下用Beckman SW41转子, 40000rpm离心44小时。

    (4).用密度梯度分馏器(185型,ISCO)通过管底钻孔用不相容的密度液(如Fluorinert FC40;ISCO)向上移位分馏梯度液。先用成分收集器收集0.84ml, 然后收集15份, 每份0.8ml。