| (3). 用4分钟以上的时间将Beckman48-60超速离心机的转子加速到170r.p.m。然后40000rpm离心24小时,无闸停转。
(4). 在血浆层以下以0.69ml/min的流速注入稠密的疏水物质(如Maxidens,1.9g/ml,Nycomed Ltd)向上移位取代含分离LDL成份的梯度液, 并用A280持续监测洗出液。 (5). 测量管中已被密度1.09g/ml NaBr溶液取代的血浆梯度。
(6). 通过出现在密度间区: 1.025-1.034g/ml(LDL1), 1.034-1.044g/ml(LDL2)和1.044-1.060g/ml(LDL3)的最大峰值来确定LDL的主要亚类。而次要亚类可通过吸收曲线的独特峰和肩状突出来识别。
(7). 将LDL总浓度按各吸收峰面积的比例计算单个LDL亚类的浓度。需先按特定的消光系数(LDL1: 1光密度单位=2.63mg脂蛋白1/ml; LDL2: 1光密度单位=2.94mg/ml; LDL3: 1光密度单位=1.92mg/ml)将吸收单位转换为脂蛋白总当量。
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(四)、Swinkels等的单旋梯度超速离心法
本方法通过密度梯度的条带状分离, 可清晰地认别两个LDL亚类, 即较轻的LDL1带(偶尔呈现两条细分的带)和较重的LDL2带。所分离亚类的颗粒大小及化学组成各不相同。它提供了一个从小量血清中鉴别和分离LDL亚类的简捷方法。
二、梯度胶电泳分析LDL亚群
LDL或其亚类的样本的电泳、染色及扫描方法同HDL亚类分析中所述(见前),只是用2-16%聚丙烯酰胺梯度凝胶(Pharmacia)代替4-30%的凝胶。 | 
